木瓜蛋白酶是从番木瓜浆中提取的一种植物来源蛋白酶，具有酶活高、热稳定性好、可应用于肉类嫩化、嫩肉粉、大豆肽、肉类水解、胶原蛋白肽、酵母抽提物生产中，是一种广谱性的蛋白水解酶。精准的酶活力检测，可以减少因酶活波动造成的产品质量波动，降低生产成本，同时有助于监控生产环节，及时发现问题，因此，掌握好木瓜蛋白酶酶活力测定检测方法是必不可少的一个环节。

木瓜蛋白酶活力检测原理 
木瓜蛋白酶在一定的温度与PH条件下，水解酪蛋白底物，然后加入三氯乙酸终止酶反应， 并将未水解的酪蛋白沉淀除去，滤液对紫外光有吸收，可用紫外分光光度法测定，根据吸光 度计算其酶活力。

木瓜蛋白酶酶活定义 
在一定温度（40℃）和 pH 6.0条件下，1min 水解酪蛋白产生 1μg酪氨酸所需的酶量为一个酶活力单位，以U/G表示。

酶活检测的仪器与设备
1、恒温水浴锅：精度为40土0.1℃。 
2、紫外分光光度计 波长275nm
3、漩涡混合器
4、电子天平(0.001g) 

木瓜蛋白酶酶活力检测恒温水浴设备

酶活检测试剂和溶液 
1、0.05 mol/L磷酸氢二钠溶液 
称取17.9g十二水磷酸氢二钠溶于水中，稀释到1000mL。 

3、0.05mol/L柠檬酸溶液 
称取10.5g一水柠檬酸溶于水中到1000mL。 

4、酪蛋白溶液 
称取1g干酪素（酪蛋白），加到80mL 0.05mol/L磷酸氢二钠溶液中（溶液3.1），在沸水 
浴中加热并不时搅拌，至完全溶解，冷却到室温，并加入0.05mol/L柠檬酸调到pH＝6.0。在 加入柠檬酸时要迅速搅拌，防止蛋白局部凝聚。然后以水定容到100mL。当天配制。 

5、磷酸盐—半胱氨酸EDTA缓冲溶液 
称取8.95g十二水磷酸氢二钠以400mL水溶解，加入7.0gEDTA－Na盐（乙二胺四乙酸二钠） 
和3.05g半胱氨酸盐酸盐一水化物溶解后，以１mol/L氢氧化钠／HCL调节pH6.0并定容至 
500mL。冰箱4℃保存三天。
 
6、0.4mol／L三氯乙酸（CCl3C00H）溶液，称取65.4g三氯乙酸，用水溶解并定容至l000mL。 

7、0.1mol／L盐酸溶液 吸取9mL盐酸，用水溶解并定容至1000mL即得。 

8、50μg/mL L－酪氨酸标准溶液： 精确称取预先在105℃干燥至恒重的L-酪氨酸0.05g（±0.001g）置于1000mL容量瓶中；用0.1mol／L盐酸（3.6）溶解并稀释至刻度，成为每mL含酪氨酸50μg的标准液。

紫外分光光度计

木瓜蛋白酶酶活检测方法
1、精确称取1.000g样品至50mL的试管中，加磷酸盐半胱氨酸EDTA缓冲液（3.4）24mL，于漩涡混合器中震荡3-4次至完全溶解，浸提10min后，中速定性滤纸过滤，取上清液用上述缓冲液（3.4）稀释到适当倍数待测。稀释倍数为估计酶活除以10，使吸光度值接近As。 

2、取试管二支，分别吸取 2.0mL 酶液于其中，在 40±0.1℃水浴中预热 5 分钟，其中一 
支加入同时预热的酪蛋白（3.3）溶液 2mL，混匀，40±0.1℃准确反应 10min 后，加入 4mL 
三氯乙酸溶液（3.5）终止反应，摇匀，取出静置 10min，用中速定性滤纸过滤，若滤液不 
清澈需再过滤，以水作空白，记录在 275nm 波长处用紫外分光光度计测定的滤液吸光度值 
AE。 

3、空白制作：吸取 2.0mL 酶液，先加入 4.0mL 三氯乙酸溶液（3.5）使酶灭活，10min 后 
加酪蛋白溶液（3.3）2.0mL 摇匀，取出静置 10min 中速定性滤纸过滤，按上述法测得吸光 

度 AS。 同时测定酪氨酸标准液（3.7）在 275nm 波长处的吸光度为 A0。 

木瓜蛋白酶检测报告

以上是小编分享木瓜蛋白酶酶活力检测方法，除了掌握上述检测方法外，精准的检测还得需要专业的检测设备、熟练的手法及专业检测人员，如果您不具备上述几个条件，可以把酶活力检测交给我们完成，我们拥有丰富的检测经验，完全可以满足精准苛刻的检测需求。

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